или
Поможем найти врача
звоните (ежедн. с 08 до 21) +7 (495) 125 29 51

Антинуклеарный фактор (АНФ)

Описание

К настоящему времени описано более 200 разновидностей АНА, направленных против нуклеиновых кислот, гистонов, белков ядерной мембраны, компонентов сплайсосомы, рибонуклеоротеинов, белков ядрышек и центромер. Под термином «антинуклеарный фактор» понимают тест для выявления антинуклеарных антител с помощью метода непрямой иммунофлюоресценции. 

Одним из методов выявления антинуклеарного фактора является метод непрямой иммунофлюоресценции для выявления антинуклеарных антител в сыворотке путем ее нанесения на клетки тканей перевиваемой линии человеческих клеток HEp-2 (клетки эпителиальной карциномы гортани человека линии Hep-2, содержащие много различных ядерных антигенов), используя меченый конъюгат с человеческими антителами. В качестве субстратов могут применяться и другие человеческие клеточные линии, однако благодаря хорошей морфологии и удобству культивирования именно линий Нер-2 стала общепризнанным субстратом непрямой иммунофлюоресценции. Метод обнаружения АНФ был разработан Tan в 1982, применившим в качестве субстрата человеческую перевиваемую эпителиоидную клеточную линию HEp-2. Это клеточная линия, полученная из аденокарциномы гортани человека, представляет собой крупные полиплоидные неороговевающие плоские эпителиоциты, образующие монослой на стекле. Сыворотку больного инкубируются с тканевым субстратом, при этом антинуклеарные антитела из сыворотки больного (если они присутствуют) связываются с соответствующими ядерным антигенами. Места связывания аутоантител детектируются с помощью античеловеческой антисыворотки, меченной флюоресцеином. Результаты реакции оцениваются микроскопией с помощью люминисцентного микроскопа и визуальной оценки характера свечения связавшихся антител. Среди преимуществ HEp-2 (при сравнении с криосрезами тканей животных) можно отметить высокую частоту деления клеток, позволяющую выявлять антитела к антигенам, экспрессирующимся только при делении клетки, и отсутствие клеточного матрикса ткани, затрудняющего визуализацию специфического свечения при сравнении с гистологическими срезами. При некоторых заболеваниях, например СКВ, системной склеродермии (системный склероз), некоторых инфекциях, иммунная система пациентов воспринимает ядра (белки ядер) клеток собственных тканей, как чужие, и продуцирует к ним антитела (антинуклеарные антитела - AHA). При этом они повреждают соединительную ткань, что и способствовало внедрению определения антинуклеарного фактора в качестве теста на системные заболевания соединительной ткани.   

Исследование АНФ непрямой иммунофлюоресценцией на клеточных препаратах более информативно, чем скрининговый ИФА тест на антинуклеарные антитела. Результатом является как подтверждение факта наличия антиядерных антител, так и указание на конечный титр антител и описание характера свечения выявленных антител, связанного с типом ядерных антигенов, против которых они направлены. Исследование АНФ может быть использовано в качестве подтверждающего, уточняющего, исследования при получении положительного результата в скрининговом качественном ИФА тесте, а также в качестве дублирующего дополнительного исследования. Использовать этот тест в повторе в целях оценки активности заболевания у пациентов с уже установленным диагнозом заболевания соединительной ткани нецелесообразно.  

Результаты исследования антинуклеарных антител методами ИФА и непрямой иммунофлюоресценции сопоставимы во многих клинических ситуациях. Но в некоторых случаях они могут расходиться вследствие определённых различий используемых ядерных антигенных детерминант, разной чувствительности и специфичности. Имеют место как случаи отрицательного результата в ИФА тесте при положительном АНФ, так и случаи положительного результата ИФА теста при отрицательном АНФ.

Подготовка

Специальной подготовки не требуется.

Прием гормональных препаратов (глюкокортикоиды) может повлиять на результат исследования.

Для подготовки к тесту используется  направительный бланк .

Показания

Показания к назначению исследования:

  • Диагностика и дифференциальная диагностика заболеваний соединительных тканей, включая СКВ (системную красную волчанку); смешанное заболевание соединительной ткани; синдром Шегрена; склеродермия.
  • Признаки хронического системного/локального воспалительного процесса неизвестной этиологии, артриты, артралгии, кожная сыпь, анемия неясной этиологии, почечная дисфункция, плевриты, перикардиты.

Интерпретация результатов

Единицы измерения и коэффициенты пересчета: тест полуколичественный. При отсутствии характерного свечения будет выдан ответ «не обнаружено». При наличии свечения ответ будет представлен цифровым значением титра антител (конечное разведение сыворотки, при котором результат остается положительным), с описанием типа свечения и указанием по интерпретации в комментарии.

Интерпретация результатов:
40-160 - сомнительно;
>= 320 - положительно.

Референсные значения: не обнаружено.

Положительно:
  • системные и органоспецифичные поражения соединительной ткани: системная красная волчанка (СКВ); ревматоидный артрит; синдром Шегрена; склеродермия, смешанное заболевание соединительной ткани, CREST синдром , миозиты и др.
  • инфекции (туберкулёз, острые и хронические вирусные инфекции, включая гепатит С, ВИЧ-инфекцию, подострый бактериальный эндокардит);
  • хронический активный гепатит, первичный билиарный цирроз;
  • сахарный диабет (инсулинзависимый);
  • множественный склероз;
  • лёгочный фиброз;
  • применение различных лекарственных препаратов, включая адренергические антагонисты
Тип окрашивания Природа антигена Ассоциированные заболевания
Гомогенный дсДНК хроматина
Гистоны
СКВ с почечным
синдромом
Лекарственная СКВ
Периферический ДНК СКВ
Атипический гомогенный Ламины ядра Аутоиммунный гепатит
Крапчатый (гранулярный) RNP
Sm
SS-A|SS-B
Scl-70
СКВ или смеш.забол-е
соед.ткани
СКВ
СКВ или синдром Шегрена
Склеродермия
Ядрышковый 4S-6S РНК Склеродермия
Центромерный/кинетохорный Внутренние и внешние части кинетохора CREST синдром
Цитоплазматический ASM - F-актин
AMA - Пируват
декарбоксилазный
комплекс
Jo-1,PL-7, PL-12 и др. -
тРНК-синтетазы
Аутоиммунный гепатит Первичный билиарный цирроз Полимиозит/дерматомиозит

Характер свечения не является специфичным для большинства антинуклеарных антител, исключая центромерные (CREST синдром).
Читать полность ...