ВПЧ расширенный скрининг (15+КВМ*), вагинальный соскоб

Описание

Папилломавирусная инфекция генитального тракта в последнее время выходит на первые места по распространенности среди людей. Эта инфекция настолько распространена, что при обследовании на нее положительный результат куда более ожидаем, чем отрицательный. Частота диагностирования этой инфекции в мире за последнее десятилетие возросла более чем в 10 раз, что, скорее всего, связано с пристальным вниманием к этому вирусу ученых и врачей всего мира. Такой интерес к этой инфекции связан с тем, что лишь относительно недавно были обнаружены онкогенные свойства папилломавирусов - их способность вызывать рак шейки матки и прямой кишки. Однако, способностью вызывать рак обладают лишь несколько из 100 типов вирусов папилломы человека (ВПЧ). Главным методом диагностики ПВИ является обычный клинический осмотр. Для подтверждения этого диагноза используют кольпоскопию  и цитологическое обследование (для этого берут соскоб из цервикального канала и с поверхности шейки матки). При цитологическом исследовании выявляется не сам вирус, а характерные для этой инфекции изменения в клетках эпителия шейки матки. Уточнить цитологический диагноз помогает гистологическое исследование: при этом берется не соскоб поверхностных клеток, как для цитологии, а кусочек ткани, и изучается не только строение клеток, но и правильность расположения их слоев. При беременности обычно биопсию не производят.

Для определения типов вируса и их онкогенного риска используют полимеразную цепную реакцию (ПЦР), при помощи которой определяются фрагменты ДНК возбудителя. Она позволяет точно установить наличие вируса ВПЧ в шейке матки. Это важно для прогноза развития заболеваний шейки матки.

Преимуществами тестирования на ДНК ВПЧ являются простота взятия материала, автоматизация метода, унифицированность получаемых результатов, быстрота выполнения исследования, высокая специфичность у женщин старше 30 лет (у подростков и молодых женщин из-за высокого показателя спонтанной элиминации вируса клиническая интерпретация положительного результата должна проводиться с осторожностью).

Использовавшийся ранее метод классической ПЦР, позволяющий определить факт наличия/отсутствия в биоматериале пациента ВПЧ, недостаточно информативен. Определение типа вируса позволяет оценить риск развития неоплазии и дифференцировать персистенцию вируса от случая нового заражения при динамическом наблюдении. Высокая вирусная нагрузка рассматривается как один из факторов, снижающих спонтанную элиминацию вируса и увеличивающих риск развития неоплазии. Поэтому в последнее время широкое распространение получили количественные тесты по определению клинически значимых типов ВПЧ.

Digene-тест, основанный на методе «гибридного захвата», часто называют «золотым стандартом» диагностики папилломавирусной инфекции. Существует две модификации Digene-теста: для выявления папилломавирусов, ассоциированных с неоплазией шейки матки (типы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68) и палилломатоза гортани (типы 6, 11, 42, 43, 44). Digene-тест позволяет выявить клинически значимое количество вируса папилломы, имеет высокую чувствительность, прогностическую ценность, однако не позволяет дифференцировать тип ВПЧ и достаточно дорог.

Указанных недостатков лишен метод ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени (RT-PCR), позволяющем определить количество ДНК клинически значимых типов ВПЧ в образце. Результаты исследования представлены в геном-эквивалентах (ГЭ); количество ГЭ пропорционально количеству копий вируса в образце. Технологические особенности RT-PCR позволяют врачу-клиницисту подобрать оптимальный вариант диагностического лабораторного обследования каждого пациента и, при необходимости, динамического мониторинга ВПЧ. Стандартизация диагностических тест-систем на основе RT-PCR даёт возможность пересчёта полученных результатов в единицы Digene, поэтому все клинические рекомендации по интерпретации результатов Digene-теста могут быть применены для результатов, полученных методом RT-PCR.

Необходимым условием корректного количественного анализа является чёткое соблюдение техники получения соскоба эпителиальных клеток, поэтому в состав пакетов по диагностике и мониторингу ВПЧ введён специальный параметр - контроль взятия материала (КВМ). КВМ представляет собой количество геномной ДНК человека в биоматериале, источником которой являются эпителиальные клетки, попадающие в пробу при правильной технике взятия биоматериала. КВМ позволяет количественно оценить адекватность взятия соскоба, а также произвести пересчёт результатов исследования на клетки человека.

Выявляемые показатели

Индивидуальные результаты количественного определения наиболее распространённых типов ВПЧ (4 типа HPV + КВМ):

• высокого онкогенного риска (HPV 16, HPV 18);
  
• низкого онкогенного риска (HPV 6, HPV 11).
  

Количественные результаты по группам клинически значимых типов HPV высокого онкогенного риска (13 типов HPV):

• HPV 16, 31, 33, 35, 52, 58;
  
• HPV 18, 39, 45, 59;
  
• HPV 51, 58, 68.
  

Материал для исследований:

• для женщин: соскоб эпителия с границы здоровой ткани цервикального канала и шейки матки;
  
• для мужчин: соскоб эпителия уретры.
  

Взятие образцов урогенитальных соскобов. Для получения объективного результата необходимо, чтобы исследуемый материал содержал возможно большее количество эпителиальных клеток и минимальное количество слизи и примеси крови. Неадекватное взятие биоматериала контролируется специальным параметром – КВМ. Взятие урогенитальных соскобов проводится стерильным одноразовым зондом в пластиковые пробирки объемом 1,5 мл с 500 мкл транспортной среды.

Порядок взятия материала в пробирку с транспортной средой. Открыть крышку пробирки. С помощью одноразового зонда произвести соскоб эпителиальных клеток из соответствующего биотопа (цервикальный канал, уретра). Перенести зонд с биоматериалом в пробирку с транспортной средой, зонд тщательно прополаскать в транспортной среде, затем извлечь и выбросить (при необходимости взятия биоматериала из нескольких биотопов, повторить процедуру, каждый раз забирая материал новым зондом в новую пробирку). Пробирку плотно закрыть крышкой и промаркировать. В направительном бланке обязательно указать пол пациента (мужской или женский).

Транспортировка и хранение исследуемого материала. ВНИМАНИЕ! Время от взятия материала до начала исследования не должно превышать 24 часов. Транспортировать и хранить образцы до начала исследования при +2...+8°С. В случае невозможности доставки материала в лабораторию в течение 24 часов допускается однократное замораживание материала на срок до 1 месяца.

* КВМ - Контроль достаточности взятияматериала

Подготовка

Специальной подготовки к исследованию не требуется. Перед взятием материала из уретры пациенту рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5-2 часов.

Показания

Определение типа ВПЧ с количественной оценкой вирусной нагрузки рекомендуется:

• при выявлении любых изменений на шейке матки;
  
• для оценки эффективности вакцинации;
  
• для контроля проводимой терапии;
• в качестве скринингового обследования специальных групп женщин.
  

Стартовый возраст для начала скрининга:

• с 21 года или в течение 3 лет после начала половой жизни;
  
• с 18 лет при высокой степени сексуальной активности;
  
• с 30 лет для новых программ (основанных на выявлении ДНК ВПЧ) или с 25 лет для существующих программ (классическое цитологическое исследование).
  

Специальные группы, которым показан скрининг:

• женщины, имеющие в анамнезе рак шейки матки;
• женщины в возрасте 25-65 лет, которым никогда не проводилось цитологическое исследование или проводилось более 3 лет назад;
• женщины с кровотечением в репродуктивном периоде, кровотечениями после наступления менопаузы, посткоитальными кровотечениями.

Интерпретация результатов

Способ представления результата. Индивидуальный количественный результат по каждому выявляемому показателю.

Результат выдаётся в абсолютных единицах:
Lg (копий/образец) и единицах Digene. Для удобства трактовки результатов в ответе используется цветовая маркировка.

Контроль взятия материала

•  
  количество клеток человеческого эпителия в исследуемом образце более 10⁴ копий/образец: достаточное для анализа количество биоматериала;
•  
  количество клеток человеческого эпителия в исследуемом образце менее 10⁴ копий/ образец: НЕ достаточное для анализа количество биоматериала

Дифференцировка типов ВПЧ:

•  
  типы ВПЧ низкого онкогенного риска
  
•  
  типы ВПЧ высокого/среднего онкогенного риска
  

Интерпретация результата. При обнаружении в ходе диагностики или мониторинга клинически значимых типов ВПЧ дальнейшее ведение пациентов осуществлять в соответствие с методическими рекомендациями для врачей.